現(xiàn)今,
高效液相色譜系統(tǒng)的應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)廣于氣相色譜法。它廣泛用于合成化學(xué)、石油化學(xué)、生命科學(xué)、臨床化學(xué)、藥物研究、環(huán)境監(jiān)測、食品檢驗及法學(xué)檢驗等領(lǐng)域。
高效液相色譜系統(tǒng)的重要結(jié)構(gòu)組成:
?。?)高壓泵
HPLC的發(fā)展帶動了泵系統(tǒng)的發(fā)展。泵是高效液相色譜系統(tǒng)中較重要的組成部分,主要是將流動相從溶劑貯存器送入液相系統(tǒng)中,并在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。目前LC系統(tǒng)中使用的大多數(shù)泵都是通過電動活塞的往復(fù)運動來產(chǎn)生流量的(往復(fù)泵)。由于活塞的運動可以產(chǎn)生“脈沖”。
(2)進樣器
進樣器位于泵的旁邊。較簡單的方法是使用注射器將樣品注入液相系統(tǒng)。現(xiàn)在一般都使用六通進樣閥和自動進樣器。其中,自動進樣器可以在設(shè)定的時間內(nèi)重復(fù)進樣。
?。?)色譜柱
色譜柱主要是用來分離混合物中各組分。目前常用的是不銹鋼外殼的柱子,而不是玻璃柱。通常使用的填料是二氧化硅或聚合物凝膠。用于液相色譜LC的洗脫液有酸性或堿性的,由于不銹鋼對多種溶劑具有耐受性,因此大多數(shù)柱殼由不銹鋼制成。
?。?)檢測器
檢測器是將色譜柱分離出來的各組分檢測出來。當(dāng)待測物不存在時,洗脫液的成分是一致的,而加入待測物可以改變洗脫液的組成,檢測器就可以測量這種差異,并轉(zhuǎn)換成電信號傳遞給記錄儀。檢測器有多種,如紫外可見光檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器等等。
?。?)數(shù)據(jù)記錄儀
檢測器檢測到的洗脫液的變化是以電信號的形式呈現(xiàn)的,因此我們的眼睛是看不到,需要借助計算機的數(shù)據(jù)處理器(積分器)。數(shù)據(jù)處理器有多種類型,如一個簡單的由內(nèi)置打印機和文字處理器組成的系統(tǒng),或帶有專門為LC系統(tǒng)設(shè)計的軟件系統(tǒng),這種系統(tǒng)不僅具有數(shù)據(jù)采集功能,還具有峰值擬合、基線校正、自動濃度計算、分子量測定等功能。
?。?)脫氣機
HPLC系統(tǒng)中可能存在一些肉眼看不見的氣體,會導(dǎo)致噪音增大,基線不穩(wěn)定等現(xiàn)象。脫氣機使用特殊的聚合物膜管來去除氣體,聚合物膜管表面的很多非常小的孔允許空氣通過,同時可以阻止任何液體通過。
?。?)柱溫箱
液相色譜分離通常受柱溫的影響很大。為了獲得一致的結(jié)果,保持溫度一致是很重要的。對于某些分析,例如糖和有機酸,在50~80°C下可以獲得更好的結(jié)果。因此,色譜柱通常放在柱形加熱器中。