高效液相色譜是一種高效、精準(zhǔn)的色譜分離技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于藥物分析、生化標(biāo)志物檢測(cè)、環(huán)境污染物檢測(cè)等領(lǐng)域。下面將介紹高效液相色譜系統(tǒng)的操作方法。
 

　　I.原料準(zhǔn)備
 

　　1.溶劑：高純度有機(jī)溶劑，如純度達(dá)到HPLC級(jí)別的甲醇、乙腈、乙醇等。
 

　　2.樣品：要求樣品在水中溶解度較高，通常采用精密天平稱取數(shù)毫克的樣品，加入適量的有機(jī)溶劑中，并攪拌均勻。
 

　　3.內(nèi)標(biāo)：內(nèi)標(biāo)的加入可提高分析方法的準(zhǔn)確度和精確度，如對(duì)組蛋白酶結(jié)合位點(diǎn)的鋅離子測(cè)定操作，可加入5-氧化-硫代硫糖酸(5-OSA)作為內(nèi)標(biāo)。
 

　　II.儀器操作
 

　　1.開(kāi)機(jī)：打開(kāi)HPLC系統(tǒng)電源，啟動(dòng)軟件，確認(rèn)參數(shù)設(shè)置無(wú)誤。
 

　　2.準(zhǔn)備流動(dòng)相：按照實(shí)驗(yàn)方案中流動(dòng)相的比例將水、有機(jī)溶劑調(diào)配好。將混合好的流動(dòng)相用過(guò)濾器過(guò)濾，并用氣流除去氣泡，以免影響儀器和分析結(jié)果。
 

　　3.填充色譜柱：色譜柱是HPLC系統(tǒng)的核心部件。填充色譜柱前，將色譜柱和進(jìn)樣器、檢測(cè)器與儀器連接好。將色譜柱加熱至適宜的溫度后，開(kāi)啟泵浦，將流動(dòng)相通過(guò)色譜柱包層填充物，直至色譜柱內(nèi)充滿。
 

　　4.樣品處理：可采用樣品預(yù)染色、前處理、提取等方法，以保證色譜分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。
 

　　5.樣品進(jìn)樣：將樣品針頭插入進(jìn)樣口，將樣品推入進(jìn)樣器中，通過(guò)手動(dòng)或自動(dòng)進(jìn)樣器，將樣品送入色譜柱進(jìn)行分離。
 

　　6.檢測(cè)：將檢測(cè)器的信號(hào)記錄下來(lái)，經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)處理和分析，得出樣品中目標(biāo)分量的濃度或含量。
 

　　III.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
 

　　1.結(jié)果判定：分析結(jié)果中，樣品和內(nèi)標(biāo)物的峰形、峰高、保留時(shí)間等是判斷分析結(jié)果是否準(zhǔn)確、可靠的關(guān)鍵。
 

　　2.分析數(shù)據(jù)處理：對(duì)于分析結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行合理的數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，通過(guò)計(jì)算、繪圖等方法，得出樣品中目標(biāo)分量的含量、純度等數(shù)據(jù)。
 

　　綜上所述，高效液相色譜操作方法需要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行，有機(jī)溶劑、樣品、內(nèi)標(biāo)等原料的使用要求嚴(yán)格，同時(shí)要認(rèn)真操作儀器，遵守維護(hù)要求，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。